การเพาะเนื้อเยื่อ-17

วันนี้ได้
ฟรอย 5 ม้วน
ถุงมือ
ที่ปิดปาก
น้ำกลั่น ครึ่งโหล
กระกาษรองตัด
หลอดให้แสงสว่าง
ผ้าทำความสะอาด

สั่งซื้อรอส่งมี
หลอดยูวี 4หลอด  สองพัน
อาหารms + ถ้วยตวง 1680บาท


ยังขาด
ฟอมารีน
ฟร้อกกี้
ด่างทับทิม
กล่องคลีนรูม
ถาดสแตนเลท


ที่ยังขาดอยู่

ขวดแบล็ค ยังหาำม่ได้ ท่าจะต้องซื้อเหล้ามาเททิ้งเอาขวดซะก็ไม่รู้
กระดาษรองตัด
ถาดเอสค่พับครึ่ง
ฟอมารีน
อาหาร
บิกเกอร์ตวง
ฟรอยห่อของนึ่ง
ฟร็อกกี้
หลอดยูวี อาแปะบอก ไม่รู้จัก 5555 บ้านนอกขนาดบ้านเรา

เท่านี้   เท่านี้  เท่านี  เท่านี้  เท่านี้จริงๆ ที่ยังหาตังซื้อไม่ได้


=====================


อาหารผงสำเร็จที่คุณน้องแจ่มสั่งซื้อมาต้องถามรายละเอียดการเตรียมมาด้วย
นะครับ เพราะแต่ละเจ้ามีวิธีเตรียม ไม่เหมือนกันครับ และต้องถามมาด้วยว่า
เค้าผสมน้ำตาลมาด้วยแล้ว หรือเราต้องผสมเอง ปกติอาหาร1ลิตร จะผสมน้ำตาล
ทรายขาว 30 กรัม ครับ

วิธีเตรียมผมคัดลอกมาให้จากที่ผมเคยโพสบรรยายไว้  ก็ละเอียดพอสมควร
มาตบแต่ง เพิ่มเติมอีกเล็กน้อยให้อ่านง่ายเป็นหัวข้อๆดังนี้ ครับ

โดยส่วนใหญ่เค้าจะขายให้เรามีสองขนาด
คือขนาดทดลอง จะส่งมาให้เป็นผง เมื่อผสมปรับปริมาตรแล้ว ได้ 1ลิตร

และขนาด เมื่อปรับปรมาตรแล้วได้ 10 ลิตร

และที่สำคัญต้องถามเค้าด้วยว่าผสมใส่น้ำตาลมาพร้อมผงเคมีอาหารด้วยหรือเปล่า
หรือมีแต่เคมีอาหารเฉยๆ ด้วยครับ


1. วิธีผสมสูตร MS สำหรับขนาด1ลิตร(กรรมวิธีแต่ละแลปอาจไม่เหมือนกัน)

ปกติผมจะใช้หม้อสแตนเลส เป็นที่ผสมอาหาร

ฉีกซองStock สำเร็จรูป1ลิตร เทใส่หม้อ ใส่น้ำกลั่นประมาณ500 cc
(เป็นน้ำกลั่นใช้ทางการแพทย์ มีจำหน่ายที่ร้านขายยา และสถานพยาบาล
จะบรรจุมาเป็นขนาด1ลิตร)

ถ้ายังไม่ใส่น้ำตาลมาเราต้องมาใส่น้ำตาลทราย 30กรัม ด้วยครับ

คนให้ละลายหมด ต้องละลายจนใสนะครับไม่ให้มีเกล็ดของผงสารเคมีอยู่เลย

2. ปรับ pH ให้ได้ประมาณ 5.6-5.8
ถ้าสูงไปใส่กรด(น้ำส้มสายชู)
ต่ำไปใส่ด่าง (KOH หรือผงฟูละลายน้ำ)
ต้องใจเย็นปรับpHให้แน่ใจนะครับ ไม่งั้นวุ้นจะไม่แข็งตัวเมื่อนึ่งเสร็จแล้วครับ

3. ปรับปริมาตรด้วยน้ำที่เหลือ ใหได้ 1ลิตร ปกติใช้น้ำกลั่นขนาดขวด1 ลิตร
ก็เทที่เหลือจนหมดขวด เอาขึ้นตั้งไฟกลางๆ คนเบา เอาผงวุ้นใส่ ประมาณ 4-10 กรัม

แล้วแต่ยี่ห้อ ถ้าเป็นเจลไลท ก็น้อยหน่อยเพราะแพง ปกติผมนอกจากเจลไลท์แล้ว
ผมใช้วุ้นทำขนมของไทยตรานางเงือก ครับ

จนผงวุ้นละลายจนหมด ไม่ต้องรอจนเดือด ร้อนแค่คนจนผงวุ้นละลายก็พอ แล้วยกของเหลว
ส่วนผสมทั้งหมดลงจากเตา เตรียมกรอกใส่ขวด(ขวดที่ล้างสะอาด แล้วต้ม ส่วนฝาล้างแล้วลวก
นำมาเช็ด ตากแดดให้แห้ง เก็บเตรียมไว้กรอกอาหารวุ้น)

4. เอามากรอกใส่ขวด หรือถุงร้อน ประมาณ 20-30 cc ต่อขวด หรือประมาณ 1/4 ของขวด
หรือถุง ปิดฝาขวดพอตึงๆมือ ไม่ต้องแน่นครับ

5. เอาไปนึ่ง ที่อุณหภูมิ 121 องศาซี ความดัน 15ปอนด์ ต่อตารางนิ้ว
เลี้ยงให้อุณหภูมิและความดันคงที่ ไป 20 นาที
ครบแล้วก็ปิดไฟ(หรือปิดแก๊ส) ค่อยๆเปิดวาล์ไล่ไอน้ำออกลดความดัน (อย่าเปิดเร็ว
เดี๋ยววุ้นเละครับ)
ถ้าใช้ซึ้งธรรมดา ตั้งให้น้ำเดือด ถึงเอาซึ้งบรรจุอาหาร และซึ้งอุปกรณ์ที่ต้องใช้
รวมถึงน้ำสะอาดที่ต้องใช้เวลาฟอกทำความสะอาดชิ้นเนื้อเยื่อ อุปกรณ์แพ็กด้วยฟรอย
แยกเป็นชุดๆ ทุกชุดห่อด้วยฟรอยอลูมิเนียม ใส่ลงซึ้งนึ่ง ครับ

จับเวลาหลังน้ำเดือด25นาที น้ำต้องเดือดตลอด ครบ25นาที ปิดไฟยกลง ยังไม่ต้องเปิดฝาซึ้ง
รอจนเย็น ถึงเปิดฝาซึ้ง แกะถุงฟรอยผ้าที่นึ่งเอาผ้ามาเช็ดละอองน้ำที่ขวด พร้อมกับขันปิดฝาขวด
ให้แน่น และเช็ดถุงฟรอยอุปกรณ์ให้พอแห้ง และ

6. ใส่เก็บทั้งหมดไว้ในกล่องสะอาดที่ได้เตรียมไว้ ก่อนเปิดฝากล่องพ่นสเปรย์แอลกอฮอ75%
ไปในอากาศเหนือฝากล่อง และก่อน ปิดฝากล่อง ให้พ่นสเปรย์แอลกอฮออีกครั้งครับ ทำทุก
ครั้งให้เป็นนิสัย ก่อนที่เปิดและปิดกล่องสะอาด ครับ

จะใช้งาน ถ้าจะเอาอาหารออกมาใช้ อาหารในขวด ควรเก็บไว้ดูเชื้ออย่าน้อย3วันถึงหนึ่งอาทิตย์
ว่าไม่มีเชื้อรา เชื้อต่างๆขึ้นที่อาหาร ถ้าขึ้นต้องทิ้ง เตรียมใหม่ครับ

ถ้าทำ10ลิตร ส่วนใหญ่ผมจะแบ่งทำทีละ 5 ลิตร ครับเพราะวุ้นมันจะแข็งตัวก่อน
เรากรอกลงขวดเล็กหรือถุงร้อนเล็ก เสร็จ ครับ

อ่านวิธีเตรียมทำ ช้าๆนะครับ ผมเขียนขั้นตอนเป็นข้อๆ ทำตาม ทีละขั้นตอนครับ
เป็นวิธีเตรียมอาหารที่ปลอดเชื้อ ที่เราต้องเตรียมก่อน  เตรียมทำความสะอาด
ฟอกชิ้นเนื้อเยื้อครับ

ครั้งแรก ควรตัดชิ้นเนื้อเยื่อ ใส่ในขวดอาหารขนาดเล็ก 4 หรือ 8 อ๊อนซ์ก่อนครับ

อย่าเพิ่งใส่ในขวดใหญ่เลย เพราะถ้าเกิด คอนทามิเนต หรือติดเชื้อ เราก็จะยังมีขวดอื่น
เอาไปใช้ได้ครับ ถ้าทำลงในขวดใหญ่เลย ถ้าเสีย จะเสียหมดทั้งขวด แก้ไม่ได้ครับ

การทำซับคัลเจอร์ หรือเปลี่ยนอาหาร ครั้งที่สอง เราถึงค่อยเอาลงขวดใหญ่ ครับ
การเอาลงขวดใหญ่หมายความถึงเราจะไม่ขยายเนื้อเยื่ออีกต่อไปแล้ว ต่อไปก็จะเป็นการ
เอาออกจากขวดใหญ่ เอาลงเครื่องปลูกละครับ

เตรียมอาหารแล้วถ้าสงสัยโพสถามขั้นตอนเพิ่มเติมได้ครับ

หลังจากเตรียมอาหารได้ แล้วเราจะมาหัดฟอกหรือการทำความสะอาด ชิ้นเนื้อเยื่อ จากตายอด
ตาข้าง หรือจากเยื่อเจริญกันต่อไปครับ
--------------------------------------------------------------------



อยู่ว่างๆเอาใบมีด และด้ามมาฝึกใส่ใบและ ถอดใบ ให้คล่องครับ
และลองใช้ตัด และหั่น หน่อ เง้า ราก กล้วย เล็กๆ ให้คล่องไปพลางๆ ก่อน
โดยตัดออกมาเป็นชิ้นขนาด 10มิล ถึง15มิล แล้วตัดแบ่งออกเป็นชิ้นๆละ 2-3มิล
5ชิ้นครับ
ทำซ้ำๆให้คล่อง ครับ
ฝึกการใช้มีด ให้คล่อง พลางๆไปก่อน ครับ

========================